牛流行熱病是牛養殖過程中一種常見的疾病,根據牛流行熱病的臨床表現、流行病學特點可做出初步診斷,確診需要實驗室檢查。下面上海新楊動物藥業有限公司為大家介紹了牛流行熱病的實驗室檢查方法:
上海新楊藥業分享牛流行熱實驗室檢查方法
1、病原學檢查:可采取高熱期病牛的血液加入抗凝劑,人工感染乳鼠或乳倉鼠并通過中和試驗鑒定病毒。或將病死牛的脾、肝、肺等組織及人工感染乳鼠的腦組織制成超薄切片,電鏡檢查子彈狀或圓錐形的病毒顆粒。也可取高熱期病牛的血液或病料人工接種乳鼠后采取的含毒組織接種適宜的細胞培養物進行病毒分離,通過中和試驗或免疫熒光試驗進行病毒抗原的檢查或鑒定。另外,由于熒光抗體技術簡便、快速,除用于檢查細胞培養物中的分離物外,還可將病牛肝、脾、腎、肺等臟器或細胞培養物制成涂片或壓印片,用特異性熒光抗體染色和鏡檢。
2、血清學檢查:中和試驗是將乳鼠腦組織或細胞培養物制成PBS懸浮液作為病毒抗原,其含毒量為200個/mILD50。待檢血清經56℃30min滅活后,從1:5起進行2倍遞進稀釋,每一稀釋度吸取1mL于試管內,另取一支試管加入1:5稀釋的正常血清(60℃30min滅活)作為對照。然后各試管中加入等量的上述病毒懸浮液,充分混勻后置于37℃溫箱內中和1h。每一稀釋度腦內接種3~5只乳鼠。根據乳鼠死亡和存活數,計算出被檢血清的50%中和效價。也可采用“雙份血清”進行中和試驗,如果血清抗體效價增加4倍或4倍以上即可做出診斷。
補體結合試驗是將樣品接種于BHK-21細胞單層,置于37℃培養48~72h,待細胞病變達90%以上收毒。細胞毒液經反復凍融3次,加入2%滅活豚鼠血清,再凍融5次,以2000r/min離心10min,取其上清液測定效價合格,即制成細胞毒凍融抗原(V抗原)。對人工感染牛康復期血清陽性檢出率達,自然感染急性病牛康復期血清陽性檢出率為97.8%,并且具有較高的特異性。
此外,也可用瓊脂凝膠擴散試驗檢測。