免疫接種后效果如何?能不能抵抗傳染病?這是我們十分關心的問題。免疫效果檢測的方法很多,諸如紅細胞凝集抑制試驗、瓊脂擴散沉淀試驗、中和試驗、補體結合試驗、玫瑰花環試驗等。陜西正陽生物科技有限公司現將常用的而且一般單位可以進行的紅細胞凝集抑制試驗和瓊脂擴散沉淀試驗的原理介紹于后,供參考。
陜西正陽生物介紹免疫接種效果檢測方法
1、紅細胞凝集抑制試驗(以新城疫抗體檢測為例)。原理新城疫病毒和其他一些病毒能與雞的紅細胞發生凝集反應,當有抗新城疫病毒抗體存在時,由于抗體于病毒 (抗原)發生中和,使病毒凝集紅細胞的作用發生抑制。抗體的量越多這種抑制作用越大。根據這一原理設計了新城疫抗體檢測的紅細胞凝集抑制試驗。
紅細胞凝集抑制試驗有常量法和微量法,微量法是在96孔V型塑料反應板上進行,操作簡便,中等規模的雞場可以進行。
2、瓊脂擴散沉淀試驗(AGD)
原理瓊脂擴散沉淀試驗,簡稱瓊擴試驗。是根據抗原和抗體能在含有電解質的瓊脂凝膠中向周圍擴散的,當擴散的抗原、抗體相遇時發生沉淀反應,形成肉眼可見的沉淀線這一原理設計的。由于抗原抗體反應是特異性的,因此,用瓊擴試驗可以檢測抗原,也可以檢測抗體,而且可以檢測抗原和抗體的效價。
瓊擴試驗操作簡便、檢出率高,可用于多種雞病的檢測,如馬立克氏病、法氏囊病、傳染性喉氣管炎等。
操作方法
① 瓊脂板的制備:按配方制備瓊脂凝膠。
瓊脂條:1克
氛化鈉:8克
笨酚:少許
蒸餾水:100毫克
加熱至瓊脂完全溶化,四層紗布過濾,補充水分到100毫升。趁熱將瓊脂倒入平皿中,使厚度為3~4毫米,加蓋冷卻,凝固后置普通冰箱中備用,防凍結,可保存1周左右。
② 打孔:使用前取出平皿,進行打孔,孔的分布如圖3,孔的直徑2~3毫米,孔與孔之間的距離應是3毫米左右。孔內的瓊脂塊可用牙簽或針頭挑出。打孔后把平皿底部在火焰上稍加熱,使瓊脂緊貼平皿底壁,防止樣品從平皿壁與瓊脂間流走。打孔器可以用鍋針制作,也可用易拉罐的鋁皮剪成適當大小卷曲而成,直徑可以有多種,如2毫米、3毫米或再大一點,依需要而定。
③ 加樣:用微量加樣器或皮頭滴管吸取待檢血清加在周圍孔中,每孔可加一個樣品,中間孔加標準抗原,也可在周圍的任一個孔中加標準陽性血清作對照。樣品要加滿,但不要溢出。加樣后置20~30℃反應,24、48、72小時進行觀察。
樣品多時需要進行編號,樣品號應與孔號一致,以免錯亂,瓊脂板上寫號時可用毛筆蘸碳索墨汁書寫,也可用記號筆在平皿底壁書寫。其他筆無法寫上。
④ 結果判定:陽性反應者待檢血清孔與中央孔之間有灰白色沉淀線,無此線者為陰性。觀察時應以日光燈為光源,對燈光調節平皿的角度可以很容易發現沉淀線。
瓊脂試驗可以定性也可定量。如要測法氏囊血清的杭體效價時,可以先把血清在96孔反應板上進行倍比稀釋,然后依次把稀釋后的血清加在周圍孔中進行試驗。蛋黃抗體效價也可用此法測定。